УДК 616.981.51
А.А. АБДИРАСИЛОВА¹, Б.К. КУРМАНОВ¹, А.К. КАСЕНОВА¹, Ш. БАХТЫБЕККЫЗЫ¹,
А.С. ЖУНУСОВА¹, Н.К. МУКАШЕВ¹, Н.П. КАБЫШЕВА¹, С.Т. АБДИКАРИМОВ²,
А.К. ЖАПАРОВА², А.Е. АБИДОВА^2
1Казахский научный центр карантинных и зоонозных инфекций им. М. Айкимбаева
Комитета по защите прав потребителей, МНЭ РК, г. Алматы, Казахстан.
²Республиканский центр карантинных и особо опасных инфекций МЗ КР,
г. Бишкек, Кыргызская Республика
ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ ТЕСТ-СИСТЕМЫ В ФОРМАТЕ ТРИПЛЕКС
ДЛЯ ДЕТЕКЦИИ И ИДЕНТИФИКАЦИИ СИБИРЕЯЗВЕННОГО МИКРОБА

Для обеспечения биологической безопасности страны необходимо развитие приоритетных направлений биотехнологии, создание совершенных средств обнаружения патогенных биологических агентов. Сибирская язва – зоонозная инфекция, возбудителем которой является Bacillus anthracis, продолжает оставаться серьёзной проблемой для ветеринарии и здравоохранения Казахстана.
Цель исследования. Конструирование генодиагностической тест-системы для детекции и идентификации возбудителя сибирской язвы в биологическом материале и объектах окружающей среды на основе ПЦР в формате мультиплекс.
Материал и методы. Вирулентные и вакцинные (Ценковского и СТИ) штаммы B. anthracis; изоляты, подозрительные на B. anthracis; 30 штаммов гетерологичных микроорганизмов. Для характеристики исследуемого материала использовались стандартные микробиологические методы. Для тестирования сконструированной ПЦР системы был использован метод ПЦР в форматах униплекс и мультиплекс с последующим учетом результатов методом гель-электрофореза.
Результаты и обсуждение. Разработана система из трех пар праймеров GBAA-F/R, pag-F/R и cap-F/R для амплификации фрагментов, специфических для сибиреязвенного микроба локусов GBAA_4239 (хромосома), pagA (плазмида pXO1) и capA (плазмида pXO2), соответственно. На основе разработанных праймеров сконструирована диагностическая тест-система, позволяющая проводить высокоспецифическую детекцию и идентификацию штаммов вида B. anthracis. Праймеры разработаны с учетом их использования в формате мультиплекс. Молекулярный вес получаемых ампликонов составляет 452 (ген pagA), 347 (ген capA) и 240 (ген GBAA_4239) пар нуклеотидов, что позволяет легко их дифференцировать. Подобрана оптимальная для всех трех пар праймеров температура отжига (54°C). Проведено тестирование эффективности, чувствительности и специфичности разработанных праймеров и ПЦР тест-систем на вирулентных и вакцинных штаммах B. anthracis, а также на штаммах гетерогенных микроорганизмов. Учёт результатов производился по конечной точке методом гель-электрофореза.
Выводы. Сконструирована новая эффективная тест-система для детекции и идентификации штаммов возбудителя сибирской язвы методом ПЦР в форматах униплекс, дуплекс и триплекс. Чувствительность разработанной ПЦР тест-системы составляет 3,9 пг/мкл ДНК B.anthracis,

Ключевые слова: возбудитель сибирской язвы, B.anthracis, праймеры, мультиплекс ПЦР, тест-система.

 

скачать